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        微小隱孢子蟲和安氏隱孢子蟲卵囊壁蛋白組學分析及診斷標識蛋白鑒定
         
             論文目錄
         
        致謝第5-6頁
        中英文縮略語表第6-12頁
        摘要第12-14頁
        第一部分 文獻綜述第14-21頁
            1. 隱孢子蟲概述第14-15頁
                1.1 隱孢子蟲概述第14頁
                1.2 隱孢子蟲生活史第14-15頁
            2 隱孢子蟲卵囊純化及體外脫囊第15-17頁
                2.1 隱孢子蟲卵囊純化分離第15-16頁
                2.2 隱孢子蟲體外脫囊第16-17頁
            3. 隱孢子蟲卵囊壁研究進展第17-18頁
            4. 隱孢子蟲蛋白質組學研究第18-19頁
            5. 隱孢子蟲檢測和診斷研究進展第19-21頁
        第二部分 微小隱孢子蟲和安氏隱孢子蟲卵囊壁分離純化第21-30頁
            1. 引言第21頁
            2 材料和方法第21-26頁
                2.1 材料第21-22頁
                    2.1.1 糞便樣品來源第21頁
                    2.1.2 主要生物試劑第21頁
                    2.1.3 耗材與儀器第21-22頁
                        2.1.3.1 耗材第21-22頁
                        2.1.3.2 主要儀器第22頁
                    2.1.4 溶液配制第22頁
                2.2 方法第22-26頁
                    2.2.1 隱孢子蟲卵囊收集第22頁
                    2.2.2 安氏隱孢子蟲蟲種鑒定第22-24頁
                    2.2.3 隱孢子蟲卵囊純化第24-25頁
                    2.2.4 隱孢子蟲體外脫囊第25頁
                    2.2.5 隱孢子蟲卵囊壁分離純化第25-26頁
            3 結果和分析第26-28頁
                3.1 隱孢子蟲卵囊純化結果第26-27頁
                3.2 隱孢子蟲脫囊率第27頁
                3.3 隱孢子蟲卵囊壁分離結果第27-28頁
            4 結論和討論第28-30頁
        第三部分 微小隱孢子蟲和安氏隱孢子蟲卵囊壁定性蛋白組學第30-44頁
            1. 引言第30頁
            2 材料和方法第30-34頁
                2.1 材料第30-31頁
                    2.1.1 卵囊壁來源第30頁
                    2.1.2 主要試劑與試劑盒第30-31頁
                    2.1.3 試驗儀器第31頁
                    2.1.4 溶液配制第31頁
                    2.1.5 生物信息學分析軟件第31頁
                2.2 方法第31-34頁
                    2.2.1 樣品準備第31-32頁
                    2.2.2 卵囊壁蛋白提取及濃度測定第32頁
                    2.2.3 SDS-PAGE分析第32頁
                    2.2.4 胰酶降解和HPLC分級第32-33頁
                    2.2.5 液相色譜-質譜聯用分析第33頁
                    2.2.6 數據庫搜索第33頁
                    2.2.7 蛋白注釋及功能富集第33-34頁
            3 結果和分析第34-41頁
                3.1 蛋白提取質控第34-35頁
                3.2 蛋白鑒定結果統計第35頁
                3.3 鑒定到蛋白功能注釋第35-39頁
                    3.3.1 鑒定到蛋白的功能分類第35頁
                    3.3.2 鑒定到蛋白的亞細胞定位分類第35-37頁
                    3.3.3 鑒定到蛋白的COG/KOG功能分類第37-39頁
                3.4 鑒定到蛋白功能富集第39-41頁
                    3.4.1 KEGG通路富集第39頁
                    3.4.2 蛋白結構域富集第39-41頁
            4 結論和討論第41-44頁
        第四部分 微小隱孢子蟲cgd7_5140和安氏隱孢子蟲cand_020680基因的克隆表達與定位第44-60頁
            1 引言第44頁
            2 材料和方法第44-52頁
                2.1 材料第44-45頁
                    2.1.1 蟲株、質粒和菌株第44頁
                    2.1.2 試驗試劑與試劑盒第44-45頁
                        2.1.2.1 主要試驗試劑第44頁
                        2.1.2.2 主要試劑盒第44-45頁
                    2.1.3 主要儀器第45頁
                2.2 方法第45-52頁
                    2.2.1 C.parvum和C.andersoni全基因組DNA提取第45頁
                    2.2.2 基因序列分析及引物設計合成第45頁
                    2.2.3 目的基因的PCR擴增第45-46頁
                    2.2.4 重組克隆載體的構建第46-48頁
                        2.2.4.1 Cpcgd7_5140和Cacand_020680PCR產物回收純化第46頁
                        2.2.4.2 鏈接pMD18-T載體第46-47頁
                        2.2.4.3 連接產物轉化E.coli DH5α感受態細胞第47頁
                        2.2.4.4 單菌落PCR驗證及測序第47頁
                        2.2.4.5 重組克隆質粒的提取與雙酶切鑒定第47-48頁
                            2.2.4.5.1 重組克隆質粒的提取第47-48頁
                            2.2.4.5.2 重組克隆質粒雙酶切鑒定第48頁
                    2.2.5 重組表達載體的構建第48-49頁
                        2.2.5.1 pGEX-4T-1表達載體雙酶切第48頁
                        2.2.5.2 目的基因與pGEX-4T-1表達載體的連接第48-49頁
                        2.2.5.3 重組表達載體的鑒定第49頁
                    2.2.6 重組蛋白的表達與驗證第49-50頁
                        2.2.6.1 重組表達載體轉化E.coli Rosetta第49頁
                        2.2.6.2 單菌落PCR驗證及測序第49頁
                        2.2.6.3 重組蛋白的體外誘導表達第49頁
                        2.2.6.4 重組蛋白SDS-PAGE檢測第49-50頁
                            2.2.6.4.1 蛋白樣品處理第49-50頁
                            2.2.6.4.2 SDS-PAGE膠的配制第50頁
                            2.2.6.4.3 SDS-PAGE電泳第50頁
                        2.2.6.5 Western-blot驗證重組蛋白第50頁
                    2.2.7 重組蛋白的純化及濃度測定第50-51頁
                    2.2.8 多克隆抗體的制備與檢測第51-52頁
                        2.2.8.1 多克隆抗體的制備第51頁
                        2.2.8.2 多克隆抗體效價檢測第51-52頁
                    2.2.9 目的蛋白在隱孢子蟲卵囊上的表達定位第52頁
            3 結果和分析第52-57頁
                3.1 蛋白序列分析預測第52-53頁
                3.2 Cpcgd7_5140和Cacand_020680序列擴增第53頁
                3.3 重組克隆質粒驗證與鑒定第53-54頁
                3.4 重組表達質粒驗證與鑒定第54頁
                3.5 重組蛋白質的誘導表達、鑒定與純化第54-56頁
                3.6 多克隆抗體效價檢測第56-57頁
                3.7 隱孢子蟲卵囊中目的蛋白的表達定位第57頁
            4 結論和討論第57-60頁
                4.1 目的基因的選擇第57頁
                4.2 蛋白表達系統選擇及純化分析第57-58頁
                4.3 抗血清的制備第58頁
                4.4 重組蛋白在隱孢子蟲卵囊上表達定位分析第58-60頁
        第五部分 結論和創新點第60-61頁
        參考文獻第61-68頁
        ABSTRACT第68-70頁

         
         
        論文編號BS4734437,這篇論文共70
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