| 致謝 | 第4-11頁 |
| 摘要 | 第11-12頁 |
| 1. 文獻綜述 | 第12-22頁 |
| 1.1 cGAS的發現及臨床意義 | 第12-14頁 |
| 1.1.1 cGAS的結構 | 第12-13頁 |
| 1.1.2 cGAS的免疫功能 | 第13-14頁 |
| 1.1.3 cGAS的演化 | 第14頁 |
| 1.2 IFN的發現及臨床意義 | 第14-17頁 |
| 1.2.1 IFN的分類 | 第15頁 |
| 1.2.2 IFN的產生 | 第15頁 |
| 1.2.3 IFN的生物活性 | 第15-17頁 |
| 1.2.3.1 抗病毒活性 | 第15-16頁 |
| 1.2.3.2 抑制細胞分裂與抗腫瘤活性 | 第16頁 |
| 1.2.3.3 調節免疫活性 | 第16頁 |
| 1.2.3.4 其它活性 | 第16頁 |
| 1.2.3.5 IFN的臨床應用 | 第16-17頁 |
| 1.3 白細胞介素的發現及臨床意義 | 第17-18頁 |
| 1.3.1 ILs的來源 | 第17頁 |
| 1.3.2 ILs的生物學功能 | 第17-18頁 |
| 1.3.2.1 促進免疫細胞的免疫反應 | 第17-18頁 |
| 1.3.2.2 促進免疫細胞的自分泌和旁分泌 | 第18頁 |
| 1.3.2.3 對免疫反應的調節 | 第18頁 |
| 1.4 禽腺病毒(Fowl adenovirus, FadV) | 第18-21頁 |
| 1.4.1 FadV的分類 | 第18-19頁 |
| 1.4.2 FadV的基因組 | 第19-20頁 |
| 1.4.3 FadV的致病性 | 第20頁 |
| 1.4.4 IBH | 第20頁 |
| 1.4.5 HPS | 第20-21頁 |
| 1.5 展望 | 第21-22頁 |
| 2. 引言 | 第22-24頁 |
| 3. 材料與方法 | 第24-40頁 |
| 3.1 材料 | 第24-26頁 |
| 3.1.1 細胞和病毒 | 第24頁 |
| 3.1.2 細胞培養材料 | 第24頁 |
| 3.1.3 抗體 | 第24頁 |
| 3.1.4 主要儀器設備 | 第24-25頁 |
| 3.1.5 常規生化試劑的配制 | 第25-26頁 |
| 3.2 方法 | 第26-40頁 |
| 3.2.1 chcGAS分子克隆 | 第26-30頁 |
| 3.2.1.1 chcGAS引物設計及合成 | 第26-27頁 |
| 3.2.1.2 3×Flag-CMV-14-chcGAS重組質粒的構建 | 第27-30頁 |
| 3.2.2 chcGAS結構以及系統發育分析 | 第30-31頁 |
| 3.2.2.1 chcGAS一級結構分析 | 第30頁 |
| 3.2.2.2 chcGAS二級結構分析 | 第30頁 |
| 3.2.2.3 chcGAS三級結構分析 | 第30頁 |
| 3.2.2.4 chcGAS組織分布表達譜 | 第30頁 |
| 3.2.2.5 chcGAS系統發育分析 | 第30-31頁 |
| 3.2.3 轉染 | 第31頁 |
| 3.2.4 chcGAS亞細胞定位分析 | 第31頁 |
| 3.2.5 qRT-PCR分析 | 第31-33頁 |
| 3.2.5.1 RNA提取 | 第31頁 |
| 3.2.5.2 RNA反轉錄 | 第31-32頁 |
| 3.2.5.3 qRT-PCR檢測 | 第32-33頁 |
| 3.2.6 免疫熒光分析 | 第33頁 |
| 3.2.7 蛋白質免疫印跡(Western Blot, WB)檢測 | 第33-35頁 |
| 3.2.7.1 蛋白收取 | 第33-34頁 |
| 3.2.7.2 BCA蛋白含量測定 | 第34頁 |
| 3.2.7.3 SDS-PAGE膠電泳 | 第34頁 |
| 3.2.7.4 濕轉法轉膜 | 第34-35頁 |
| 3.2.8 RNAi | 第35-36頁 |
| 3.2.8.1 siRNA引物設計與合成 | 第35-36頁 |
| 3.2.8.2 siRNA轉染及效率檢測 | 第36頁 |
| 3.2.9 彗星試驗 | 第36-37頁 |
| 3.2.10 FadV-4病毒滴度測定 | 第37-38頁 |
| 3.2.10.1 病毒擴增 | 第37頁 |
| 3.2.10.2 滴度測定 | 第37-38頁 |
| 3.2.11 統計學分析 | 第38-40頁 |
| 4 結果與分析 | 第40-60頁 |
| 4.1 3×Flag-CMV-14-chcGAS重組質粒的構建 | 第40-43頁 |
| 4.2 chcGAS序列及結構分析 | 第43-45頁 |
| 4.3 chcGAS的組織分布及系統發育分析 | 第45-47頁 |
| 4.4 chcGAS的亞細胞定位 | 第47-48頁 |
| 4.5 過表達chcGAS促進ifn-β和il-1β表達 | 第48-49頁 |
| 4.5.1 在CEF細胞中過表達cGAS并使用外源刺激后檢測ifn-β和il-1β表達 | 第48頁 |
| 4.5.2 在LMH細胞中過表達cGAS并使用外源刺激后檢測ifn-β和il-1β表達 | 第48-49頁 |
| 4.6 chcGAS誘導的ifn-β及il-1β表達依賴于STING信號通路 | 第49-51頁 |
| 4.6.1 構建siSTING、siTBK1、siIRF3的CEF細胞系及敲減效率檢測 | 第50頁 |
| 4.6.2 在CEF細胞中siSTING、siTBK1、siIRF3后過表達cGAS檢測ifn-β和il-1β的表達 | 第50-51頁 |
| 4.7. 敲減chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和il-1β表達上調 | 第51-54頁 |
| 4.7.1 在CEF及LMH細胞中sicGAS的效率檢測 | 第51-52頁 |
| 4.7.2 在CEF細胞中敲減chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和il-1β表達上調 | 第52-53頁 |
| 4.7.3 在LMH細胞中敲減chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和利il-1β表達上調 | 第53-54頁 |
| 4.8 chcGAS可識別DNA損傷所產生的內源性dsDNA | 第54-56頁 |
| 4.8.1 Eto處理CEF細胞引起DNA損傷 | 第55頁 |
| 4.8.2 Eto誘導DNA損傷所產生胞質dsDNA并且部分與chcGAS共定位 | 第55-56頁 |
| 4.8.3 Eto誘導的DNA損傷反應激活了chcGAS介導的天然免疫反應 | 第56頁 |
| 4.9 敲減chcGAS促進FadV-4的增殖 | 第56-60頁 |
| 5 討論與結論 | 第60-62頁 |
| 5.1 討論 | 第60-61頁 |
| 5.2 結論 | 第61-62頁 |
| 參考文獻 | 第62-70頁 |
| 英文摘要 | 第70-71頁 |
廣告服務 
