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        cGAS在雞天然免疫及病毒感染中的作用及分子機制
         
             論文目錄
         
        致謝第4-11頁
        摘要第11-12頁
        1. 文獻綜述第12-22頁
            1.1 cGAS的發現及臨床意義第12-14頁
                1.1.1 cGAS的結構第12-13頁
                1.1.2 cGAS的免疫功能第13-14頁
                1.1.3 cGAS的演化第14頁
            1.2 IFN的發現及臨床意義第14-17頁
                1.2.1 IFN的分類第15頁
                1.2.2 IFN的產生第15頁
                1.2.3 IFN的生物活性第15-17頁
                    1.2.3.1 抗病毒活性第15-16頁
                    1.2.3.2 抑制細胞分裂與抗腫瘤活性第16頁
                    1.2.3.3 調節免疫活性第16頁
                    1.2.3.4 其它活性第16頁
                    1.2.3.5 IFN的臨床應用第16-17頁
            1.3 白細胞介素的發現及臨床意義第17-18頁
                1.3.1 ILs的來源第17頁
                1.3.2 ILs的生物學功能第17-18頁
                    1.3.2.1 促進免疫細胞的免疫反應第17-18頁
                    1.3.2.2 促進免疫細胞的自分泌和旁分泌第18頁
                    1.3.2.3 對免疫反應的調節第18頁
            1.4 禽腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)第18-21頁
                1.4.1 FadV的分類第18-19頁
                1.4.2 FadV的基因組第19-20頁
                1.4.3 FadV的致病性第20頁
                1.4.4 IBH第20頁
                1.4.5 HPS第20-21頁
            1.5 展望第21-22頁
        2. 引言第22-24頁
        3. 材料與方法第24-40頁
            3.1 材料第24-26頁
                3.1.1 細胞和病毒第24頁
                3.1.2 細胞培養材料第24頁
                3.1.3 抗體第24頁
                3.1.4 主要儀器設備第24-25頁
                3.1.5 常規生化試劑的配制第25-26頁
            3.2 方法第26-40頁
                3.2.1 chcGAS分子克隆第26-30頁
                    3.2.1.1 chcGAS引物設計及合成第26-27頁
                    3.2.1.2 3×Flag-CMV-14-chcGAS重組質粒的構建第27-30頁
                3.2.2 chcGAS結構以及系統發育分析第30-31頁
                    3.2.2.1 chcGAS一級結構分析第30頁
                    3.2.2.2 chcGAS二級結構分析第30頁
                    3.2.2.3 chcGAS三級結構分析第30頁
                    3.2.2.4 chcGAS組織分布表達譜第30頁
                    3.2.2.5 chcGAS系統發育分析第30-31頁
                3.2.3 轉染第31頁
                3.2.4 chcGAS亞細胞定位分析第31頁
                3.2.5 qRT-PCR分析第31-33頁
                    3.2.5.1 RNA提取第31頁
                    3.2.5.2 RNA反轉錄第31-32頁
                    3.2.5.3 qRT-PCR檢測第32-33頁
                3.2.6 免疫熒光分析第33頁
                3.2.7 蛋白質免疫印跡(Western Blot, WB)檢測第33-35頁
                    3.2.7.1 蛋白收取第33-34頁
                    3.2.7.2 BCA蛋白含量測定第34頁
                    3.2.7.3 SDS-PAGE膠電泳第34頁
                    3.2.7.4 濕轉法轉膜第34-35頁
                3.2.8 RNAi第35-36頁
                    3.2.8.1 siRNA引物設計與合成第35-36頁
                    3.2.8.2 siRNA轉染及效率檢測第36頁
                3.2.9 彗星試驗第36-37頁
                3.2.10 FadV-4病毒滴度測定第37-38頁
                    3.2.10.1 病毒擴增第37頁
                    3.2.10.2 滴度測定第37-38頁
                3.2.11 統計學分析第38-40頁
        4 結果與分析第40-60頁
            4.1 3×Flag-CMV-14-chcGAS重組質粒的構建第40-43頁
            4.2 chcGAS序列及結構分析第43-45頁
            4.3 chcGAS的組織分布及系統發育分析第45-47頁
            4.4 chcGAS的亞細胞定位第47-48頁
            4.5 過表達chcGAS促進ifn-β和il-1β表達第48-49頁
                4.5.1 在CEF細胞中過表達cGAS并使用外源刺激后檢測ifn-β和il-1β表達第48頁
                4.5.2 在LMH細胞中過表達cGAS并使用外源刺激后檢測ifn-β和il-1β表達第48-49頁
            4.6 chcGAS誘導的ifn-β及il-1β表達依賴于STING信號通路第49-51頁
                4.6.1 構建siSTING、siTBK1、siIRF3的CEF細胞系及敲減效率檢測第50頁
                4.6.2 在CEF細胞中siSTING、siTBK1、siIRF3后過表達cGAS檢測ifn-β和il-1β的表達第50-51頁
            4.7. 敲減chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和il-1β表達上調第51-54頁
                4.7.1 在CEF及LMH細胞中sicGAS的效率檢測第51-52頁
                4.7.2 在CEF細胞中敲減chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和il-1β表達上調第52-53頁
                4.7.3 在LMH細胞中敲減chcGAS抑制dsDNA刺激引起的ifn-β和利il-1β表達上調第53-54頁
            4.8 chcGAS可識別DNA損傷所產生的內源性dsDNA第54-56頁
                4.8.1 Eto處理CEF細胞引起DNA損傷第55頁
                4.8.2 Eto誘導DNA損傷所產生胞質dsDNA并且部分與chcGAS共定位第55-56頁
                4.8.3 Eto誘導的DNA損傷反應激活了chcGAS介導的天然免疫反應第56頁
            4.9 敲減chcGAS促進FadV-4的增殖第56-60頁
        5 討論與結論第60-62頁
            5.1 討論第60-61頁
            5.2 結論第61-62頁
        參考文獻第62-70頁
        英文摘要第70-71頁

         
         
        論文編號BS4734433,這篇論文共71
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